In vitro antimicrobial activity of the organic extract of Cladonia substellata Vainio and usnic acid against Staphylococcus spp. obtained from cats and dogs / Atividade antimicrobiana in vitro do extrato orgânico de Cladonia substellata Vainio e ácido úsnico frente Staphylococcus spp. obtidos de cães e gatos

ladonia substellata Vainio is a lichen found in different regions of the world, including the Northeast of Brazil. It contains several secondary metabolites with biological activity, including usnic acid, which has exhibited a wide range of biological activities. The aim of this study was to evaluate the in vitro antimicrobial activity of the organic extract of C. substellata and purified usnic acid. Initially, Staphylococcus spp., derived from samples of skin and ears of dogs and cats with suspected pyoderma and otitis, were isolated and analyzed. In antimicrobial susceptibility testing against Staphylococcus spp., 77% (105/136) of the isolates were resistant to the antimicrobials tested. In the assessment of biofilm production, 83% (113/136) were classified as producing biofilm. In genetic characterization, 32% (44/136) were positive for blaZ, no isolate (0/136) was positive for the mecA gene, and 2% (3/136) were positive for the icaD gene. The in vitro antimicrobial activity of the organic extract of C. substellata and purified usnic acid against Staphylococcus spp. ranged from 0.25mg/mL to 0.0019mg/mL, inhibiting bacterial growth at low concentrations. The substances were more effective against biofilm-producing bacteria (0.65mg/mL-0.42mg/mL) when compared to non-biofilm producing bacteria (2.52mg/mL-2.71mg/mL). Usnic acid and the organic extract of C. substellata can be effective in the treatment of pyoderma and otitis in dogs and cats caused by Staphylococcus spp.(AU)

Cladonia substellata Vainio é um líquen encontrado em diversos continentes do mundo, inclusive no nordeste do Brasil, possui vários metabólitos secundários com atividade biológica, entre eles, o ácido úsnico, que tem apresentado uma vasta gama de atividades biológicas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro do extrato orgânico de C. substellata e do ácido úsnico purificado. Para isto, foram isolados Staphylococcus spp. de amostras de pele e orelha de cães e gatos com suspeita de piodermatite e otite. No teste de sensibilidade aos antimicrobianos frente Staphylococcus spp., 77% (105/136) foram resistentes. Na avaliação da produção de biofilme 83% (113/136) foram classificadas como produtoras de biofilme. Na caracterização genotípica, 32% (44/136) foram positivos para o gene blaZ, nenhum isolado (n=136) foi positivo para o gene mecA, e 2% (3/136) foram positivos para o gene icaD. A atividade antimicrobiana in vitro do extrato orgânico de C. substellata e do ácido úsnico purificado para Staphylococcus spp. variou de 0,25mg/ml a 0,0019mg/ml, inibindo o crescimento bacteriano em baixas concentrações. Foram mais eficazes contra bactérias produtoras de biofilme (0,65mg/ml-0,42mg/ml) quando comparadas às não produtoras de biofilme (2,52mg/ml-2,71mg/ml). Viabilizando a utilização do ácido úsnico e do extrato orgânico de C. substellata, no tratamento de otite e piodermatite em cães e gatos com o envolvimento de Staphylococcus spp.(AU)

Biofilm formation by Rhodococcus equi and putative association with macrolide resistance / Formação de biofilme por Rhodococcus equi e possível associação com resistência a macrolídeos

Rhodococcus equi is a facultative intracellular pathogen, which cause severe pyogranulomatous pneumonia in foals and tuberculosis-like lesions in humans. Its ability to form biofilm was described in strains isolated from chronic diseases associated to treatment failures in humans. This study aimed to verify the biofilm formation by 113 R. equi isolated from equine samples (clinical and fecal) using two different methods (biofilm-culturing with and without additional glucose and epifluorescence microscopy). We also aimed to determine the efficacy of azithromycin, clarithromycin and erythromycin on R. equi in established biofilm. We found 80.5% (26/41) and 63% (58/72) biofilm-positive isolates, in fecal and clinical samples, respectively. The additional glucose increased the biofilm formation by R. equi fecal samples, but not by clinical samples. The antimicrobials tested herein were not able to eradicate R. equi in biofilm even at higher concentrations. This is the first study showing the biofilm formation by R. equi isolated from equine samples. Our findings indicate that R. equi biofilm-producers may be more resistant to the antimicrobials evaluated. Further studies are warranted to test this hypothesis...

Rhodococcus equi é um patógeno intracelular facultativo, o qual causa pneumonia piogranulosa severa em potros e lesões semelhantes à tuberculose em humanos. A sua capacidade de formar biofilme foi descrita em cepas humanas, isoladas a partir de doenças crônicas associadas a falhas de tratamento. Este estudo teve como objetivo verificar a formação de biofilme por 113 cepas de R. equi, isoladas a partir de amostras de equinos (clínicas e fecais), utilizando-se dois diferentes métodos (biofilme em cultura - com e sem adição de glicose - e microscopia de epifluorescência). Além disso, buscou-se determinar a eficácia da azitromicina, claritromicina e eritromicina sobre biofilme consolidado de R. equi. Verificou-se 80,5% (26/41) e 63% dos isolados (58/72) positivos para formação de biofilme, em amostras fecais e clínicas, respectivamente. A adição de glicose amentou a formação de biofilme em amostras fecais, mas não em amostras clínicas. Os antimicrobianos aqui testados não foram capazes de erradicar R. equi em biofilme consolidado, mesmo em concentrações elevadas. Este é o primeiro estudo a demonstrar a formação de biofilme por cepas de R. equi isoladas a partir de amostras de equinos. Os resultados indicam que os isolados de R. equi produtores de biofilme podem ser mais resistentes aos antimicrobianos avaliados. Estudos adicionais são necessários para testar essa hipótese...

Invasin gimB found in a bovine intestinal Escherichia coli with an adherent and invasive profile.

The invasin gimB (genetic island associated with human newborn meningitis) is usually found in ExPEC (Extraintestinal Pathogenic Escherichia coli) such as UPEC (uropathogenic E. coli), NMEC (neonatal meningitis E. coli) and APEC (avian pathogenic E. coli). In NMEC, gimB is associated with the invasion process of the host cells. Due to the importance of E. coli as a zoonotic agent and the scarce information about the frequency of gimB-carrying strains in different animal species, the aim of this study was to investigate the presence of gimB in isolates from bovine, swine, canine and feline clinical samples. PCR was conducted on 196 isolates and the identity of the amplicons was confirmed by sequencing. Of the samples tested, only E. coli SB278/94 from a bovine specimen was positive (1/47) for gimB, which represents 2.1% of the bovine isolates. The ability of SB278/94 to adhere to and invade eukaryotic cells was confirmed by adherence and gentamicin-protection assays using HeLa cells. This is the first study that investigates for gimB in bovine, canine and feline E. coli isolates and shows E. coli from the intestinal-bovine samples harboring gimB.

Suscetibilidade antimicrobiana de Staphylococcus spp: isolados de cães com pioderma superficial / Antimicrobial susceptibility of Staphylococcus spp: isolated from canine superficial pyoderma

Foram obtidas 154 amostras de lesões cutâneas de cães com pioderma superficial atendidos no Serviço de Dermatologia Veterinária do Hospital Veterinário Universitário (HVU) da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), com o objetivo de determinar a suscetibilidade antimicrobiana de isolados de Staphylococcus spp. e avaliar a presença de multirresistência. Após isolamento e identificação, as cepas foram submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos, cujos resultados evidenciaram menores percentuais de resistência à associação amoxicilina e ácido clavulânico (1,9 por cento), cefadroxil (1,9 por cento), cefalexina (1,9 por cento) e vancomicina (0,6 por cento). Os maiores percentuais de resistência foram frente à amoxicilina (60,4 por cento) e penicilina G (60,4 por cento). A multirresistência foi detectada em 23,4 por cento e a resistência à meticilina em 5,8 por cento das amostras. Pode-se concluir que os isolados de Staphylococcus spp. apresentam elevada suscetibilidade aos antimicrobianos comumente utilizados no tratamento dos piodermas superficiais em cães atendidos no HVU-UFSM, como a cefalexina e a amoxicilina associada ao ácido clavulânico, confirmando a eleição desses fármacos para o tratamento de cães com esta afecção. A suscetibilidade diminuída das cepas frente às fluoroquinolonas, também recomendadas pela literatura para o tratamento de pioderma, permite sugerir que estes fármacos não devem mais ser considerados na seleção empírica. A identificação de Staphylococcus spp. multirresistentes na população canina estudada justifica análises bacteriológicas periódicas e regionais de lesões cutâneas de cães com pioderma superficial, a fim de minimizar a seleção de bactérias resistentes, possíveis falhas terapêuticas e também motiva a antimicrobianoterapia prudente.

A total of 154 samples of skin lesions were obtained from dogs with superficial pyoderma that were assisted by the Veterinary Dermatology Service at the University Veterinary Hospital (HVU), Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), aiming to determine the antimicrobial susceptibility of Staphylococcus spp. isolates and evaluate the presence of multidrug resistance profile. After bacterial isolation and identification, the strains were tested for antimicrobial susceptibility, and the results showed lower percentages of resistance to the amoxicillin and clavulanic acid association (1.9 percent), cefadroxil (1.9 percent), cephalexin (1.9 percent) and vancomycin (0.6 percent). The highest percentages were towards amoxicillin (60.4 percent) and penicillin G (60.4 percent). The multidrug resistance was detected in 23.4 percent and the methicillin resistance in 5.8 percent of the samples. It may be concluded that the Staphylococcus spp. isolates present high susceptibility to key antimicrobials used in the treatment of superficial pyodermas in dogs at the HVU-UFSM, such as cephalexin and the amoxicillin and clavulanic acid association, confirming the preference for these drugs when treating dogs with this disorder. The susceptibility of the strains to fluoroquinolones, also recommended in the literature for the treatment of pyodermas, allows suggesting that such drugs should not be considered in the empirical selection. The identification of multidrug-resistant Staphylococcus spp. in the studied canine population justifies periodic and regional bacteriological tests of skin lesions in dogs with superficial pyoderma, possible therapeutic failures and also motivates wise use of antimicrobial therapy.

Atividade antimicrobiana do oleorresina de copaíba (Copaifera reticulata) frente a Staphylococcus coagulase positiva isolados de casos de otite em cães / Antimicrobial activity of copaiba oil (Copaifera reticulata) against coagulase positive Staphylococcus of canine otitis

The aim of this study was to investigate the antimicrobial activity of the oleoresin Copaifera reticulata Ducke against Staphylococcus coagulase positive (SCP) isolated from otitis externa in dogs. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of the oleoresin were determined by broth microdilution method. In addition, we verified the antimicrobial susceptibility profile of the isolates of SCP by agar diffusion method. Eight classes of antimicrobial were used to calculate the multidrug resistance. The chemical composition of the oleoresin was performed by gas chromatography coupled to the mass spectrometry (GC/MS), and β-caryophyllene, β-bisabolene, and (E)-α-bergamotene were the main compounds found. The copaiba oleoresin showed a MIC90 of 0.164mg/mL and a CBM90 of 1.3mg/mL. The multidrug resistance was found in 27% of the strains tested. The results suggest that copaiba oleoresin has bacteriostatic and bactericidal activity even in multidrug-resistant coagulase-positive strains.

O objetivo do presente trabalho foi investigar o potencial antimicrobiano do oleorresina de Copaifera reticulata Ducke em isolados de Staphylococcus coagulase positiva (SCP) provenientes de casos de otite externa em cães. O método de microdiluição em caldo foi utilizado para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) de oleorresina de copaíba. Em adição, foi determinado o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos dos isolados de SCP pelo método de difusão em ágar. Oito classes de antimicrobianos foram usadas para o cálculo de multirresistência antimicrobiana. A determinação da composição química do oleorresina de copaíba foi realizada por cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC/MS), sendo que β-cariofileno, β-bisaboleno e (E)-α-bergamoteno foram os compostos majoritários. O oleorresina de copaíba demonstrou CIM90 de 0,164mg/mL e CBM90 de 1,31mg/mL. A multirresistência foi verificada em 27% das cepas testadas. Os resultados sugerem que o oleorresina de copaíba exerceu atividade bacteriostática e bactericida mesmo em cepas multirresistentes de Staphylococcus coagulase-positiva.

Moraxella bovoculi em casos de ceratoconjuntivite infecciosa bovina no Rio Grande do Sul / Moraxella bovoculi in cases of infectious bovine keratoconjunctivitis in Rio Grande do Sul, Brazil

A ceratoconjuntivite infecciosa (CI), embora raramente fatal, resulta em perdas econômicas significativas para os rebanhos bovinos e ovinos. Os principais agentes causadores dessa enfermidade são Moraxella bovis e Moraxella ovis. Em 2007 foi descrita uma nova espécie também responsável pela CI e denominada Moraxella bovoculi, que até o presente momento, não havia sido relatada no Brasil. Assim, objetivou-se com este trabalho caracterizar e distinguir 54 isolados de Moraxella spp. de amostras clínicas oriundas de 34 bovinos e 17 ovinos, encaminhadas ao Laboratório de Bacteriologia da Universidade Federal de Santa Maria no período de 1990 a 2011, visando a identificação de M. bovoculi. A distinção dos isolados foi fundamentada nas características genotípicas, pela amplificação parcial da região intergênica 16S-23S e clivagem dos produtos da amplificação com enzima RsaI. Como resultados, 25 (46%) isolados foram caracterizados como M. bovis, 17 (32%) como M. ovis e 12 (22%) como M. bovoculi. Logo, conclui-se que M. bovoculi encontra-se presente no rebanho bovino do Rio Grande do Sul e, portanto, no Brasil.

Infectious keratoconjunctivitis (IK), although rarely fatal, results in significant economic losses for cattle and sheep farmers. The main causative agents of this disorder are Moraxella bovis and Moraxella ovis. In 2007, a new species also responsible for IK was described. This newly described pathogen, called Moraxella bovoculi, was never reported in Brazil. Therefore, the aim of this study was confirmed the M. bovoculi among the samples analyzed. For this, 54 isolates of Moraxella spp. from clinical samples derived from 34 cattle and 18 sheep, sent to the laboratory of bacteriology from 1991 to 2011 was characterized. Differentiation among the species was based on genotypic characteristics, using partial amplification of 16S-23S intergenic region and cleavage products of amplification with enzyme RsaI. Results showed that 25 isolates (46%) were characterized as M. bovis, 17 (32%) as M. ovis, and 12 (22%) as M. bovoculi. This means that M. bovoculi is present among cattle herds in Rio Grande do Sul and, therefore, in Brazil.

Phylogenetic and pathotype analysis of Escherichia coli swine isolates from Southern Brazil / Análise filogenética e de patotipos de Escherichia coli isoladas de suínos no Sul do Brazil

The current study evaluated the presence of virulence factors by a multiplex PCR technique and then phylogenetically classified the studied strains into groups A, B1, B2 and D, according to Clermont et al. (2000), in 152 intestinal and extraintestinal swine isolates of Escherichia coli. Seventy seven isolates tested were positive for virulence factors. Phylogenetic characterization placed 21 samples into group A, 65 into B1, 19 into B2 and 47 into D. Fourteen urine samples were classified as uropathogenic E. coli (UPEC), nine were both UPEC and enterotoxigenic E. coli (ETEC) and four were ETEC only. The most common phylogenetic classifications were B1 and D groups. Of the analyzed fecal samples, 25 were classified as ETEC. Phylogenetically, the group of higher occurrence was B1, followed by B2, A and D. For the small intestine samples, 20 were classified as ETEC. Phylogenetic analysis found groups B1 and A to be the most commons in these samples. Six isolated tissue samples were classified as ETEC and most of them were designated as group D by phylogenetic classification. The phylogenetic analysis could be employed in veterinary laboratories in the E. coli isolates screening, including the possibility of vaccine strain selection and epidemiological searches.

O presente estudo teve por objetivo avaliar a presença de diferentes fatores de virulência em 152 isolados de Escherichia coli intestinais e extra-intestinais provenientes de suínos pela técnica de PCR multiplex e classificá-los nos grupos filogenéticos A, B1, B2 e D, de acordo com Clermont et al. (2000). Setenta e sete isolados foram positivos para pelo menos um fator de virulência. Através da caracterização filogenética, 21 isolados foram caracterizados como pertencentes ao grupo A, 65 ao grupo B1, 19 ao grupo B2 e 47 isolados ao grupo D. Quatorze isolados de urina foram caracterizados como E. coli uropatogênica (UPEC); nove apresentaram fatores de UPEC e E. coli enterotoxigênica (ETEC) simultaneamente e quatro foram classificados como ETEC. Na classificação filogenética, os isolados provenientes de amostras de urina classificaram-se principalmente nos grupos D e B1. Das amostras de fezes analisadas, 25 demonstraram fatores de virulência característicos do patotipo ETEC. Filogeneticamente, o grupo de maior ocorrência foi o B1 seguido de B2, A e D. Em relação às cepas isoladas de intestino delgado, 20 foram caracterizadas como ETEC. Pela filogenia, 23 isolados classificaram-se nos grupos A ou B1. Seis isolados de tecidos foram qualificados como ETEC e a maioria deles foram designados como pertencentes ao grupo D, pela classificação filogenética. A análise filogenética pode ser empregada em laboratórios de diagnóstico veterinário como um screening para isolados de E. coli, incluindo a possibilidade de seleção de cepas vacinais e levantamentos epidemiológicos.